Genetic diversity of Trypanosoma cruzi strains isolated from chronic chagasic patients and non-human hosts in the state of São Paulo, Brazil.

BACKGROUND: Trypanosoma cruzi shows an exuberant genetic diversity. Currently, seven phylogenetic lineages, called discrete typing units (DTUs), are recognised: TcI-TcVI and Tcbat. Despite advances in studies on T. cruzi and its populations, there is no consensus regarding its heterogeneity. OBJECTIVES: This study aimed to perform molecular characterisation of T. cruzi strains, isolated in the state of São Paulo, to identify the DTUs involved and evaluate their genetic diversity. METHODS: T. cruzi strains were isolated from biological samples of chronic chagasic patients, marsupials and triatomines through culture techniques and subjected to molecular characterisation using the fluorescent fragment length barcoding (FFLB) technique. Subsequently, the results were correlated with complementary information to enable better discrimination between the identified DTUs. FINDINGS: It was possible to identify TcI in two humans and two triatomines; TcII/VI in 19 humans, two marsupials and one triatomine; and TcIII in one human host, an individual that also presented a result for TcI, which indicated the possibility of a mixed infection. Regarding the strains characterised by the TcII/VI profile, the correlation with complementary information allowed to suggest that, in general, these parasite populations indeed correspond to the TcII genotype. MAIN CONCLUSIONS: The TcII/VI profile, associated with domestic cycles and patients with chronic Chagas disease, was the most prevalent among the identified DTUs. Furthermore, the correlation of the study results with complementary information made it possible to suggest that TcII is the predominant lineage of this work.

Genetic diversity of Trypanosoma cruzi strains isolated from chronic chagasic patients and non-human hosts in the state of São Paulo, Brazil

BACKGROUND Trypanosoma cruzi shows an exuberant genetic diversity. Currently, seven phylogenetic lineages, called discrete typing units (DTUs), are recognised: TcI-TcVI and Tcbat. Despite advances in studies on T. cruzi and its populations, there is no consensus regarding its heterogeneity. OBJECTIVES This study aimed to perform molecular characterisation of T. cruzi strains, isolated in the state of São Paulo, to identify the DTUs involved and evaluate their genetic diversity. METHODS T. cruzi strains were isolated from biological samples of chronic chagasic patients, marsupials and triatomines through culture techniques and subjected to molecular characterisation using the fluorescent fragment length barcoding (FFLB) technique. Subsequently, the results were correlated with complementary information to enable better discrimination between the identified DTUs. FINDINGS It was possible to identify TcI in two humans and two triatomines; TcII/VI in 19 humans, two marsupials and one triatomine; and TcIII in one human host, an individual that also presented a result for TcI, which indicated the possibility of a mixed infection. Regarding the strains characterised by the TcII/VI profile, the correlation with complementary information allowed to suggest that, in general, these parasite populations indeed correspond to the TcII genotype. MAIN CONCLUSIONS The TcII/VI profile, associated with domestic cycles and patients with chronic Chagas disease, was the most prevalent among the identified DTUs. Furthermore, the correlation of the study results with complementary information made it possible to suggest that TcII is the predominant lineage of this work.

Valores normais da atividade da colinesterase plasmática em anseriformes, com destaque para Alopochen aegyptiacus / Normal values of plasma cholinesterase activity in anseriformes, with emphasis on Alopochen aegyptiacus

A inibição da enzima colinesterase plasmática (BChE) pode ser utilizada como biomarcador para os efeitos da intoxicação por organofosforados e carbamatos. Nas aves, esta inibição ocorre de forma mais acentuada que nos mamíferos, porém poucos são os trabalhos publicados nestas espécies. O objetivo do estudo fo a dosagem da BChE em gansos-egípcios (Alopochen aegyptiacus) e nos anseriformes domésticos: gansos-domésticos (Anser anser domesticus) e marrecos (Anas platyrhynchos domesticus), para o estabelecimento de valores de referência normais. O trabalho possui ineditismo com relação à determinação desta enzima nos gansos-egípcios e domésticos. Os gansos e marrecos são mantidos em confinamento com fornecimento de alimentos e água ad libitum e em espaço adequado à sua manutenção no Instituto Adolfo Lutz (IAL), com a finalidade de fornecimento de sangue para a alimentação de triatomídeos do insetário de criação no Núcleo de Parasitoses Sistêmicas. Nos Alopochen aegyptiacus a média e o desvio padrão da BChE foram de 1.868 + 263,6 U/L, nos Anser anser domesticus 2.311 + 673,2 U/L e nos Anas platyrhynchos domesticus 4.290 + 86,11 U/L. (AU)

The inhibition of the plasma cholinesterase enzyme (BChE) can be used as a biomarker for the effects of intoxication by organophosphates and carbamates. In birds, this inhibition is more pronounced than in mammals, however there are few specific studies were conducted in this field. The aim of this study was to measure BChE in Egyptian geese (Alopochen aegyptiacus) and domestic anseriforms: domestic geese (Anser anser domesticus) and mallards (Anas platyrhynchos domesticus), not exposed to pesticides, for the establishment of normal values. The work is unprecedented regarding the determination of this enzyme in egyptian geese and domestic geese. Geese and mallards are kept in confinement with ad liditum food and water supply and in adequate space for their maintenance at the Adolfo Lutz Institute (IAL), for the purpose of supplying blood for the feeding of triatomines from the insectary of the Nucleus of Systemic Parasitoses. In Alopochen aegyptiacus the mean and standard deviation of BChE were 1,868 + 263,6 U/L, in Anser anser domesticus 2,311 + 673,2 U/L and in Anas platyrhynchos domesticus 4,290 + 86.11 U/L. (AU)

Preservação de ovos de helmintos e cistos de protozoários em iodo­mercurato de potássio. Revisitando experimentos realizados há cerca de 40 anos / Preservation of helminth eggs and protozoan cysts in potassium iodine­mercurate. Revisiting experiments carried out about 40 years ago

Foi realizada reavaliação sobre o estado de preservação de ovos de helmintos e cistos de protozoários mantidos por cerca de 40 anos em solução de iodo­mercurato de potássio a 0,2%. Foi observado que ovos de Schistosoma mansoni, Ancylostomidae e Trichuris trichiura e oocistos de Isospora belli mantiveram­se em condições adequadas para a sua identificação ao microscópio ótico comum. No material examinado, foi possível verificar a presença de miracídio em ovo de Schistosoma mansoni, forma larvada em ovo de T. trichiura e esporozoitos em oocistos de I. belli. (AU)

A reassessment was carried out on the preservation status of helminth eggs and protozoan cysts maintained for about 40 years in 0.2% potassium iodine­mercurate solution. It was observed that Schistosoma mansoni, Ancylostomidae and Trichiuris trichiura eggs and Isospora belli oocysts were kept in conditions suitable for their identification under a common light microscope. In the examined material, it was possible to verify the presence of miracidium in S. mansoni egg, larvae in T. trichiuraegg and sporozoites in I. belli oocysts. (AU)

Preservação de ovos de helmintos e cistos de protozoários em iodo-mercurato de potássio. Revisitando experimentos realizados há cerca de 40 anos / Preservation of helminth eggs and protozoan cysts in potassium iodine-mercurate. Revisiting experiments carried out about 40 years ago

Foi realizada reavaliação sobre o estado de preservação de ovos de helmintos e cistos de protozoários mantidos por cerca de 40 anos em solução de iodo‑mercurato de potássio a 0,2%. Foi observado que ovos de Schistosoma mansoni, Ancylostomidae e Trichuris trichiura e oocistos de Isospora belli mantiveram‑se em condições adequadas para a sua identificação ao microscópio ótico comum. No material examinado, foi possível verificar a presença de miracídio em ovo de Schistosoma mansoni, forma larvada em ovo de T. trichiura e esporozoitos em oocistos de I. belli.

A reassessment was carried out on the preservation status of helminth eggs and protozoan cysts maintained for about 40 years in 0.2% potassium iodine‑mercurate solution. It was observed that Schistosoma mansoni, Ancylostomidae and Trichiuris trichiura eggs and Isospora belli oocysts were kept in conditions suitable for their identification under a common light microscope. In the examined material, it was possible to verify the presence of miracidium in S. mansoni egg, larvae in T. trichiura egg and sporozoites in I. belli oocysts.

Manutençäo da fecundidade e oviposiçäo em triatoma infestans após décadas de criaçäo em condiçöes de laboratório / Maintenance of fecundity and oviposition in triatoma infestans after decades of breeding under laboratory conditions

O objetivo deste estudo foi avaliar a possibilidade da manutençäo da fecundidade e oviposiçäo em triatomíneos após décadas de criaçäo em condiçöes de laboratório. Foi observado o desempenho de 11 colônias de triatoma infestans do Laboratório de Triatomíneos do Instituto Adolfo Lutz. Os insetos foram mantidos em temperatura e umidade constantes (27-28 grau C e 70-80(por cento),respectivamente) e acasalados em diferentes proporçöes de machos e fêmeas. Dois ritmos de alimentaçäo foram utilizados. No primeiro, os triatomíneos foram alimentados semanalmente, e no segundo, o ritmo de alimentaçäo foi quinzenal ou a cada 21 dias. Durante o estudo marrecos foram utilizados como fonte de sangue. Os resultados confirmaram a importância do ritmo de alimentaçäo para o oviposiçäo. Insetos que receberam alimentaçäo semanal apresentaram os melhores índices de oviposiçäo, representados pelo número de ovos por fêmea por dia (ofd), entre 0.39 e 4.40 ofd, sendo mais frequente taxas acima de 1.30 ofd. Colônias que tiveram alimentaçäo quizenal ou a cada 21 dias apresentaram inexpressivos índices de oviposiçäo, entre 0.05 e 1.07 ofd, sendo mais frequente inferior a 0.30 ofd. Concluiu-se que após décadas de criaçäo em condiçöes de laboratório, é possível manter a fecundidade e a capacidade de oviposiçäo dentro dos padröes normais, em colônias de Triatoma infestans, se o ritmo de alimentaçäo dos adultos näo exceder 7 dias. O ritmo de alimentaçäo näo afetou o índice de sobrevivência dos adultos, mas foi crítico para a fecundidade e oviposiçäo. (AU)

The aim of this study was to evaluate the possibility of maintenance of fecundity and the capability of oviposition in Reduviid bugs after decades of breeding under laboratory conditions. It was observed the performance of eleven colonies of Triatoma infestans from the Laboratory of Triatomines of Adolfo Lutz Institute. Insects were mated in different ratio of males and females. Two rhythms of alimentation were used. In the first, triatomines were fed weekly, and in the second rhythm the meal were offered every fifteen or twenty one days. During all the study teals were used as blood source, and temperature and humidity were constant, at 27-28∞C and 70-80%, respectivelly. The results confirm the importance of the rhythm of alimentation for oviposition. Insects fed weekley showed the best rates of oviposition, it was represented by number of eggs by female per day (efd), between 0.39 to 4.40 efd, being more frequent up to 1.30 efd. Colonies that were fed every fifteen or twenty one days showed inexpressives rates of oviposition, between 0.05 to 1.07 efd, being more frequent below to 0.30efd. It was concluded that after decades of breeding under laboratory conditions it is possible to maintain the fecundity, into normal patterns, in the T. infestans if the rhythm of alimentation of adults donít exceed seven days. Rhythm of alimentation donít affected the survival rates of adults, but it was critical for the fecundity and oviposition. (AU)

Técnicas parasitológicas para investigaçäo de animais naturalmente infectados por flagelados do gênero Trypanosoma gruby, 1843 / Parasitologic technics for investigation of naturally infected animals by genus Trypanosoma gruby, 1843

No presente trabalho, procurou-se avaliar comparativamente as técnicas do exame de sangue a fresco, do esfregaço sanguíneo, da hemocultura e do xenodiagnóstico como procedimentos laboratoriais para triagem de hospedeiros näo humanos naturalmente infectados por flagelados do gênero Trypanosoma. De um total de 440 animais pertencentes a 22 espécies diferentes, 57(12,95%) revelaram presença de tripanossomos na circulaçäo. O xenodiagnóstico mostrou ser a técnica mais efetiva para demonstraçäo de Trypanosoma(Schizotrypanum) cruzi em Didelphis marsupialis e Philander opossum. Em Nasua nasua, Trypanosoma foi observado em todos os procedimentos investigados. As técnicas do exame de sangue a fresco e do esfregaço sanguíneo foram mais eficientes para T.(Herpetosoma) e T.(Trypanozoon) evansi entre Proechimys iheringi e Canis familiaris, respectivamente

Avaliação do biiodeto de mercúrio como preservativo de material biológico / Evaluation of mercury bi-iodide as preservative of biological samples

Foi feita uma avaliação do biiodeto de mercúrio (HgI 2 ) como preservativo de material biológico, tendo em vista a sua capacidade de conservação por longo tempo, e a propriedade de não aglutinar partículas. Ao sedimento obtido de 400 amostras de fezes acrescentou-se o iodo-mercurato de potássio a 0,20/0, preparado com formol, álcool e soluto fisiológico, na proporção de três partes de conservante para uma parte de sedimento. Numa segunda etapa empregou-se o conservante a 0,1%, preparado com benzeno, álcool, e soluto fisiológico isotônico. Como controles utilizaram-se os conservantes de Railliet & Henry, o MIF (mertiolato, iodo e formol) e o de Schaudinn. Os resultados avaliados após seis meses revelaram que o iodo-mercurato de potássio a 0,2% (primeira fórmula) preservou adequadamente cistos e trofozoítos de protozoários, além de ovos e exemplares adultos de helmintos, com exceção dos ovos de Humenolepis nana e Hymenolepis diminuta, que se apresentaram mais bem conservados usando a segunda fórmula. Resultados semelhantes obtiveram-se com os controles, evidenciando-se o iodo-mercurato de potássio pela propriedade de não aglutinar as partículas de fezes (AU).